长春西汀专栏

 【摘要】目的：建立注射用长春西汀细菌内毒素检查法。方法：按2005年版《中国药典(二部)》中细菌内毒素的相关规定进行实验。结果：样品在给定条件下对细菌内毒素检查无干扰作用。结论：建立注射用长春西汀细菌内毒素检查法具有可行性。

      注射用长春西汀适应证为改善脑梗死后遗症、脑出血后遗症、脑动脉硬化症等诱发的各种症状。本公司(保定三九济世生物药业有限公司)获批生产的长春西汀冻干粉针剂,其规格分别为5mg/支和10mg/支,其热原控制^[1]采用家兔法,但其使用说明书中明确规定不可采用静脉或肌内推注给药。在实际热原检测中.家兔静脉推注给药后死亡现象频有发生,为保护动物及实现本品科学、简捷、灵敏的质量检测,特考察注射用长春西汀的细菌内毒素检查法的可行性,结果如下：

1材料
      细菌内毒素工作标准品(规格10EU／支,批号为080322,湛江博康海洋生物有限公司)。鲎试剂(TAL,规格为0.25EU/ml,批号为0811040.湛江博康海洋生物有限公司；规格为0.25EU／ml.批号为0902202,湛江安度斯生物有限公司)。细菌内毒素检查用水(BET水,规格为5ml／支.批号为090223,湛江博康海洋生物有限公司)。注射用长春西汀(规格为5mg／支,批号为：090201；090202；090203,保定三九济世生物药业有限公司)。其余所用试管、吸管等玻璃仪器均按2005年版《中国药典(二部)》除细菌内毒素的方法进行处理。

2方法与结果
2.1 TAL灵敏度复核
      按2005年版《中国药典(二部)》附录细菌内毒素检查法^[2]用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2.0、1.0、0.5、0.25λ等系列浓度进行试验。结果表明.两批鲎试剂灵敏度测定值λc均在0.5～2.0λ之间,灵敏度符合规定。

2.2 细菌内毒素限值(L)的确定
      由公式L=K／M^[3]计算,其中K为不同给药途径,人用每千克体重每小时可接受的细菌内毒素的最大剂量。其中注射剂K=5EU／(kg·h)；M为每小时每公斤体重人所接受的最大给药剂量。本品说明书中每人每天最大剂量为30mg.人均体重按60KG计算,给药时间按lh计,则L=10EU／mg,为了保障用药安全,从严控制,最终限值定为5EU／mg。

2.3 干扰试验预实验
      在进行干扰试验之前,要进行干扰试验预实验,从而确定样品最大不干扰浓度^[4]。我国市售最高灵敏度的鲎试剂λ=0.03EU／ml,由限值可知最小浓度低于λ0.03/5EU／mg=0.O06mg／ml时,将无法采用鲎试剂方法进行内毒素检查,同时鲎试剂系列灵敏度也是2倍等比系列的.故样品浓度也以最小浓度0.006mg／ml 2倍等比系列制得.这样在发现最大不干扰浓度的同时,也能确定在细菌内毒素检查时采用何种灵敏度的鲎试剂。干扰内毒素与鲎试剂凝聚反应与鲎试剂的灵敏度无关.故采用较低灵敏度的鲎试剂(0.25EU／ml)可以排除样品中内毒素的干扰。由同一批号鲎试剂对每一稀释级别进行试验.每一级别下做2支供试品管(NPC),2支供试品阳性对照(PPC)(既含2.0λ浓度内毒素的供试品溶液),同时以BET水建立2支阴性对照(NC)2支阳性对照(PC)。实验结果NC均为阴性,PC均为阳性,其他结果见表1,由结果知样品最大不干扰浓度为0.05mg／ml。

2.4正式干扰试验
      在正式干扰试验中选择3批未检测出热原的供试品,以供试品溶液将细菌内毒素工作标准品制备成2.0、1.0、0.5、0.25λ各个浓度.同时最终供试品溶液的浓度为0.05mg／ml,另外同时以BET水制备上述浓度系列的细菌内毒素溶液。分别以上述供试品及BET水制备的内毒素溶液与2个厂家的鲎试剂混合进行干扰实验。并建立2管相应的供试品及BET水阴性对照结果见表2,由结果知E1均在0.5～2.0ES范围内,且ES在0.5～2.0λ之间。故在0.05mg／ml浓度下.注射用长春西汀不干扰细菌内毒素与鲎试剂的凝聚反应。

3讨论
      本试验采取两个不同厂家的TAL对3批注射用长春西汀进行了细菌内毒素检查的干扰试验.结果证明在不大于0.05mg／ml浓度的情况下,注射用长春西汀对于细菌内毒素与鲎试剂的凝聚反应无干扰作用,说明采用细菌内毒素法对本品进行检查是可行的。

    由鲎试剂灵敏度复核试验可知,鲎试剂与2.0λ的细菌内毒素发生凝聚反应,否则鲎试剂的灵敏度不合格,故在采取阳性对照时,制得的最终细菌内毒素浓度是2.0λ而不是1.0λ。

【参考文献】
[1]国家食品药品监督管理局.国家药品标准[S].2005.
[2]国家药典委员会.中国药典[s].二部.北京：化学工业出版社.2005：附录ⅪE-85.
[3]药品生物制品鉴定所.中国药品检验标准操作规范与药品仪器检验操作规程[M].北京:中国医药电子科技出版社,2005:319—335.
[4]杨春丽,何思宇,王艳平,等.盐酸格拉司琼原料药的细菌内毒素检查法[J] 中国药师,2009,1(12)：123—124

作者：王冲.刘柳
单位：保定三九济世生物药业有限公司,河北定兴072650)